乙酰酯酶（AChE）检测试剂盒4

2-8℃ 避光

开盖后组份按要求条件保存。

6个月

分光光度计

血清血浆/尿液/组织/细胞

分光光度计

1.可见分光光度计
2.恒温水浴锅
3.离心机
4.漩涡混匀器
5.移液器

1.纯水

1.离心管
2.吸头

1.试剂D打开后装在空的小塑料瓶内（附空瓶一只）；
2.试剂E 天冷时会有沉淀或混浊，需在37℃水浴加热至透明后即可使用。

试剂配制
1. 试剂A标准品工作液的配制：
取试剂A标准品一支加试剂F：生理盐水10ml混匀，即得1umol/ml标准品工作液，现用现配；
2. 底物缓冲液的配制：
使用前每支试剂B粉剂加试剂F：生理盐水20ml，制备成底物缓冲液；2-8℃可保存2周。
3. 显色工作液的配制：
使用前将试剂C：试剂F生理盐水=1:9稀释，制备成显色工作液；现用现配，也可一次配制30ml，避光2-8℃可保存3个月。

操作步骤：
(一)、样本前处理
组织样本：
准确称取组织重量，按重量（g）：体积（ml）=1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10min，取上清待测（同时取部分上清测定蛋白浓度）；

血清（浆）：
取不抗凝或抗凝全血1000~1500转/分，离心8min，取上层血清（浆）。一般测定时用生理盐水按1:9比例将血清（浆）稀释（具体稀释浓度以预实验结果为准）；

全血样本：
取0.1ml抗凝全血加纯水至10ml，即按1:99稀释，充分混匀；
（三）、计算公式：
A、 组织匀浆中乙酰酯酶的计算：
1. 单位定义：
每毫克组织蛋白在37℃保温6min，水解反应体系中1umol 基质为1个活力单位；

2. 计算公式：
组织匀浆中酶活力 = 测定OD值 – 对照OD值 X 标准品浓度 ÷待测样本蛋白浓度
（U/mgprot） 标准OD值 - 空白OD值 （1umol/ml） （mgprot/ml）

B、血清(浆)中乙酰酯酶的计算：
1. 单位定义：
每毫升血清样本在37℃保温6min，水解反应体系中1umol 基质为1个活力单位；

2. 计算公式：
血清（浆）中酶活力 = 测定OD值 – 对照OD值 X 标准品浓度 X待测样本测试前
（U/ml） 标准OD值 - 空白OD值 （1umol/ml） 稀释倍数

1. 计算举例：
取10倍稀释后的血清0.03ml测乙酰酯酶的活力，测得对照管OD值为0.086，测定管OD值为0.498，标准管OD值为0.190，空白管为0.032，标准管浓度为1umol/ml，则计算结果如下：

血清（浆）酶活力 = 0.498 – 0.086 X 标准品浓度 X 10 =26.08 U/ml
（U/ml） 0.190 – 0.032 （1umol/ml）

C、全血中乙酰酯酶的计算：
1. 单位定义：
每毫升全血在37℃保温6min，水解反应体系中1umol 基质为1个活力单位；

2. 计算公式：

全血中酶活力 = 测定OD值 – 对照OD值 X 标准品浓度 X待测样本测试前
（U/ml） 标准OD值 - 空白OD值 （1umol/ml） 稀释倍数