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怎么配置RIPA裂解液

更新时间:2024-09-12      点击次数:204
  RIPA裂解液是一种常用的细胞裂解缓冲液,用于从培养的细胞或组织样本中提取蛋白质。这种缓冲液能够有效破裂细胞膜和细胞器膜,释放胞内蛋白,同时通过添加的抑制剂减少蛋白降解。以下描述如何配置RIPA裂解液:
  一、准备材料和设备
  1. 材料:配置RIPA裂解液主要用到的材料包括,Tris-base、NaCl、NP-40(非离子型去垢剂)、去氧胆酸钠、SDS(十二烷基硫酸钠)、EDTA(解析铅)、去离子水、蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂等。
  2. 设备:配制所需的设备包括pH计、电子天平、磁力搅拌器以及各种量程的移液器和对应的灭菌移液枪头、容量瓶或烧杯用于配制和储存裂解液、以及调整pH的盐酸或氢氧化钠溶液。
  3. 防护用品:在配制过程中,操作者应佩戴适当的实验室防护用品,如实验服、手套和护目镜,以保障安全。
  二、配制步骤
  1. 溶解Tris-base和NaCl:使用电子天平称取适量的Tris-base和NaCl,置于预定容量的容量瓶或烧杯中,并加入适量的去离子水。
  2. 调整pH值:在磁力搅拌器的帮助下,搅拌至固体成分溶解。接着,利用pH计调整溶液的pH至7.4。通常这需要缓慢加入少量的盐酸或氢氧化钠溶液。
  3. 添加去垢剂和盐:继续向溶液中加入规定量的NP-40(1%)、去氧胆酸钠(0.5%)以及SDS(0.1%)。这些物质帮助破裂细胞膜和细胞器膜,释放出蛋白质。
  4. 加入抑制剂:为了保护释放出的蛋白质不被降解,需要添加蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂。这些抑制剂应在使用前即时添加,以免长时间放置导致失效。
  5. 补水定容:将所有溶解后的成分搅拌均匀,之后使用去离子水补足至最终所需体积。
  6. 混匀与保存:确保所有成分充分混匀后,RIPA裂解液就配制完成了。将裂解液分装到干净的容器中,通常存放于-20°C的环境中,避免反复冻融。
  三、注意事项
  1. 在使用RIPA裂解液提取蛋白之前,必须确认样品中不含有影响实验的污染物质,且根据实验需要选择适合的蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂。
  2. 由于RIPA中的一些成分(如SDS和NP-40)具有一定的毒性,操作时需小心谨慎,并遵守实验室安全规程。
  3. RIPA裂解液一旦制备,其稳定性随时间和存储条件变化,因此建议标记配制日期,并在使用前检查是否有沉淀或颜色变化。
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