无酶细胞消化液

-20℃保存

1、长期存放请分装后-20℃保存。
2、避免反复冻融。
3、冻存后溶解时注意重新混匀。

一年

1. PBS、培养液
2. 显微镜
3. 离心机

1) 尽量减少反复冻融的次数，以免失效。
2) 在使用细胞消化液的过程中，要特别注意避免消化液被细菌污染。
3) 细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。
4) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 贴壁细胞的消化：
（1） 吸除培养液，用无菌PBS、培养液洗涤细胞1次；
（2） 加入少量无酶细胞消化液，略盖过细胞即可。（一般按细胞的有效体积的10倍添加）
（3） 室温放置10min （如置于37℃脫壁反应会加速），直至细胞脫壁。（不同细胞消化时间有差异）。亦可用显微镜观察，如果细胞明显收缩并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪头吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除消化液。
（4） 加入细胞培养液或5倍体积的PBS缓冲液终止反应。如果发现消化不足，则再加入无酶细胞消化液重新消化。
（5） 1000-2000g离心3-5min，沉淀细胞，弃上清，尽量吸除无酶细胞消化液，加入含血清的培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。

2. 组织的消化：
（1） 用无菌PBS、培养液洗涤组织1次，用无菌的刮勺或茶匙将剪碎的组织碎片转移至合适容器。
（2） 按组织有效体积的5-10倍，加入无酶细胞消化液。
（3） 置于37℃作用4-48小时，无需振荡，不同的细胞消化时间有所不同。对于较难分解的肿瘤细胞，可作用5天或更长时间，但应重新用消化液悬浮。
（4） 吹打组织碎片数次，释放松散的细胞，轻轻晃动培养瓶或皿，倒置显微镜下检查分离情况。当细胞量少和/或在组织碎片中仍可见细胞时，需要继续消化。
（5） 1000-2000g离心3-5min，沉淀细胞，弃上清，尽量吸除无酶细胞消化液，加入含血清的培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。