细胞pH检测试剂盒介绍
保存温度:2-8℃ 避光
注意事项
1.细胞pH检测试剂盒(蓝色荧光)长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.探针A为DMSO溶液,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期:6个月
检测方法:流式细胞仪//激光共聚焦/荧光显微镜
适用样本:细胞
产品应用:流式细胞仪//激光共聚焦/荧光显微镜
仪器准备
1.流式细胞仪或激光共聚焦或荧光显微镜
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 2.HBSS 3. (备选)Nigericin sodium salt(相关产品BB-94002)
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
溶酶体细胞pH检测试剂盒(蓝色荧光)使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
2.pH探针为DMSO溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
细胞pH检测试剂盒通过使用pH指示剂或者pH感应探针来检测细胞内的pH值。通常有以下几种方法:
荧光探针法:
一些细胞pH试剂盒使用荧光标记的pH感应探针,这些探针可以与细胞内的氢离子(H⁺)结合。探针的荧光强度会根据pH值的变化而改变。通过测量荧光的变化,可以推算出细胞内的pH值。
例如,常用的荧光探针有SNARF-1和BCECF,这些探针在不同的pH环境下荧光强度和发射波长会发生变化,利用激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计等设备进行分析。
pH指示剂法:
另一种常见方法是使用pH指示剂,这些指示剂在不同pH下会改变颜色。该方法通常用于显微镜下观察,或者在流式细胞仪中结合使用。比如,酚红等pH指示剂可以在细胞培养基中随着pH变化而呈现不同颜色。
流式细胞术(FACS)法:
利用流式细胞术结合荧光探针,测量单个细胞的pH值。这种方法可以在细胞群体中进行高通量的pH检测。
电位计法:
电位法则利用pH电极或者离子选择性电极(ISE)直接测量细胞内的电位变化,从而计算出pH值。
常见问题:
Q1: 细胞pH检测通常使用什么原理?
A1: 主要利用对pH值敏感的荧光探针。这些探针在不同酸碱度下,其荧光强度或发射波长会发生改变,从而精确反映细胞器(如溶酶体)或细胞质内的pH值。
Q2: 为什么需要检测细胞的pH值?
A2: 细胞内pH是关键的生理参数,它影响酶活性、细胞增殖、内吞作用、细胞凋亡等多种生命活动。pH异常与肿瘤、神经退行性疾病等病理过程密切相关。
Q3: 细胞pH检测试剂盒有哪些常见应用?
A3: 广泛应用于研究细胞自噬(监测自噬溶体酸化)、肿瘤细胞代谢(瓦博格效应)、受体介导的内吞作用过程中的pH变化,以及药物对细胞内环境的影响等。
Q4: 检测细胞pH时有哪些关键注意事项?
A4: 关键点包括:确保校准曲线准确、避免探针淬灭、维持检测过程中培养环境的稳定性(如CO₂浓度),并设置合理的阳性和阴性对照组以确保结果可靠性。
Q5: 如何选择适合的细胞pH检测探针?
A5: 需根据目标细胞器(如胞质、溶酶体)选择特异性探针,并根据实验设备(如荧光显微镜、流式细胞仪)的激光器和滤光片配置,选择合适的激发/发射波长的探针。