DAPI染色试剂盒

2-8℃避光

1.长期不用可以-20℃保存。
2.染色液避免反复冻融。需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
3.试剂拆封后请尽快使用完！

6个月

1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜

1.悬浮细胞
2.贴壁细胞

1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜

1.PBS 缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X））
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
3.染色后立即进行分析。
4.染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。
5.本染色液可用于培养细胞、细胞涂片、石蜡切片、冰冻切片的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰丙酮固定后检测。
6.根据样本情况和下游的检测仪器选择合适的染色方法，只要在染色时染色工作液能充分覆盖细胞样本即可。
7.活细胞原位染色不同细胞需要的时间差异较大，可能需要较长时间，可将染液加入培养基后避光孵育30分钟-4小时，或更长时间。
8.以下以培养细胞的涂片的荧光显微镜检测为例，细胞染色不需要固定，也可以固定后染色。以下方法仅供参考，也可以请参阅相关资料使用其他方法。

1. 染色工作液的配制：
根据样品数用PBS将DAPI染色液10-100倍稀释，配制成染色工作液。
2. 细胞爬片/涂片的制备：
贴壁细胞，可将盖玻片放于培养器皿中，让培养细胞长于玻片上，然后用药物诱导细胞凋亡后取出，用4%多聚甲醛固定5min。
对于悬浮细胞，用药物诱导细胞凋亡后，500-1000g离心5分钟收集细胞，用PBS洗2次，收集调整细胞数为1X105/ml，涂片或用离心涂片，用4%多聚甲醛固定5min；
3. 用PBS洗涤涂片两次。
4. 加适量染色工作液于涂片上，室温避光染色5-30分钟。
5. 吸除染色液。
6. 用1X洗涤液洗涤涂片。
7. 用荧光显微镜检测结果。
染料-DNA复合物的激发波长为360nm，发射波长为454nm。

结果分析 ：
置于荧光显微镜下用360nm激发光观察结果：DAPI染色呈蓝白色荧光。

早期凋亡细胞呈现核浓缩，染色加深，或核染色质呈新月形聚集于核膜一边；晚期凋亡细胞表现为核碎裂成大小不等的圆形小体，并被细胞膜所包绕，即凋亡小体。

1.Xiaojun Zhou et al.
BMP-2 Derived Peptide and Dexamethasone Incorporated Mesoporous Silica Nanoparticles for Enhanced Osteogenic Differentiation of Bone Mesenchymal Stem Cells
ACS Appl. Mater. Interfaces 2015 （IF=7.145）

2.Siqin Huang et al.
Protective Effect of Electroacupuncture on Neural Myelin Sheaths is Mediated via Promotion of Oligodendrocyte Proliferation and Inhibition of Oligodendrocyte Death After Compressed Spinal Cord Injury
Molecular Neurobiology 2015 （IF=5.397）

3.Wei Feng et al.
Polyelectrolyte multilayer functionalized mesoporous silica nanoparticles for pH-responsive drug delivery: layer thickness-dependent release profiles and biocompatibility
Journal of Materials Chemistry 2013 （IF=6.101）

4.Xue Gao, Hao Zhang et al.
Mn-doped ZnSe d-dots-based α-methylacyl-CoA racemase probe for human prostate cancer cell imaging
Analytical and Bioanalytical Chemistry 2012 （IF=3.841）