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植物单线态氧检测试剂盒-绿色荧光

简要描述:产品概述 product description 贝博® BBoxiProbe® 植物组织单线态氧(1O2)检测试剂盒是一种利用新型荧光探针BBoxiProbe® O66进行植物组织单线态氧检测的试剂盒。本试剂盒中的BBoxiProbe® O66 1O2探针为绿色荧光的单线态氧探针,具有506 / 526 nm的激发/发射波长。BBoxiProbe® O66 1O2探针在植物组织中单线态氧存在的条件下,被氧化生成绿色荧光物质,绿色荧光强度与植物组织内单线态氧水平成正比,检测O66产物的荧光强度就可以知道植物组织内单线态氧的水平。在激发波长506 nm,发射波长526 nm附近,使用荧光分光光度计、荧光酶标仪等检测O66产物荧光强度,从而测定植物组织内单线态氧水平。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2024-05-09
  • 访  问  量:63

详细介绍

保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
1.探针长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.探针为DMSO溶液,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
荧光分光光度计或荧光酶标仪
适用样本
植物组织
产品特点
1.使用方便:可用荧光酶标仪、荧光分光光度计检测;
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
仪器准备
1.荧光分光光度计或荧光酶标仪
2.匀浆机/匀浆器
3.离心机
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.纯水
3.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用黑色96孔板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.荧光探针为DMSO溶液,冬季气温较低时在室内时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.使用前,先将本品取出回温至室温(20℃以上),并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
5.必须使用荧光检测专用的黑色96孔板。

使用方法
试剂准备:
根据样本数量,用纯水将O66探针10倍稀释。充分混匀,备用。
【注】:
不可以一次性将探针全部稀释。
现配现用。
O66探针液为DMSO溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
微量操作时,注意探针要有效加入匀浆液,避免没有加入。
以下步骤使用的O66探针为此步骤稀释过的探针。

样本处理:
1.刚取得的新鲜植物组织样本用PBS洗净。
2.准确称取50 mg或100 mg植物组织样本,加入500 μl-1 ml匀浆缓冲液A,用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
3.在100×g,4℃离心5分钟,取上清备用。

样本检测:
1.在96孔板中加入190微升匀浆上清液、10微升O66探针,用移液器吹打,使之充分混匀。
【注】:
不同样本的活性氧差异较大,需要根据预实验结果调整探针用量。一般加入2-10 μl探针,染色终浓度按试剂盒中探针母液的200-1000倍稀释,200倍稀释适合大多数样本。
如果荧光强度太强,超过了检测仪器的量程,可以减少探针用量。保证所有样本探针用量一致即可。
以酶标仪检测为例。也可以用荧光分光光度计检测,根据所使用仪器决定匀浆液体积和染色容器。
2.在37℃避光孵育20-30分钟。
3.置于酶标仪中,后于激发波长为506 nm、发射波长526 nm检测荧光强度。
【注】:
或使用荧光光度计等其它荧光检测设备。
必须使用荧光检测专用的黑色96孔板。
如果荧光强度太强,超过了仪器的检测范围,可以将孵育后的匀浆上清液稀释后再检测。一般稀释5-50倍。

蛋白定量:
1.另取50微升上清匀浆液,用PBS大约稀释30倍。
2.取100微升进行蛋白定量。

结果处理:
以荧光强度(RFU)/ 蛋白浓度(毫克蛋白)表示植物组织单线态氧强度。
【注】:
数据与蛋白浓度的单位无关。
此处以蛋白浓度数据作为校正系数,对不同样品进行均一化处理。
荧光强度强则单线态氧(1O2)含量高。
可以用实验中对照样本的荧光强度值为基准,待测组样本的荧光强度值占对照样本的百分比来比较单线态氧(1O2)程度差异。

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