总(TC)检测试剂盒2

2-8℃ 避光

开盖后组份按要求条件保存。

6个月

微孔板，酶标仪

血清、血浆、尿液、细胞、组织

微孔板，酶标仪

1.酶标仪//

1.蒸馏水
2.PBS 缓冲液
3.生理盐水
4.蛋白定量试剂盒

1.离心管
2.吸头

1.试剂盒仅科研使用；
2.样品含量如超出检测范围上，可用生理盐水稀释后检测，检测结果乘以稀释倍数；
3.试剂中含有防腐剂和稳定剂，可能存在一定的刺激作用或毒性，请勿直接接触皮肤、眼睛。一旦接触，即用大量清水冲洗。请勿吞服；
4.试剂防止葡萄糖、等试剂的污染；
5.试剂与样本的用量可按比例改变；

样品处理
血清、血浆样本：
从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测；

培养液样本：
吸取培养液，1000转/分，离心10分钟，取上清测定；（一般建议细胞密度在106/ml以上）

细胞样本：
1. 取适量的细胞(一般推荐>106/ml以上)，1000转/分，离心10分钟，弃上清，留细胞沉淀。
2. 用0.1mol/L、pH7~7.4 PBS或生理盐水清洗1~2次，1000转/分，离心10分钟，弃上清，留细胞沉淀。
3. 加入200~300μl的PBS或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率300W，每次3~5s，间隔30s，重复3~5次。亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心，待用。也可用裂解液裂解（TrintonX-100，1-2%,裂解30-40分钟），裂解好的液体不可离心，待用。
【注】：
 破碎好的液体可显微镜观察细胞是否破碎。

组织样本：
准确称取适量组织样本，按质量(g)：体积(ml)=1：9的比例，加入9倍体积的匀浆介质，冰浴条件下手动或机械匀浆。2500转/分，离心10分钟，取上清待用。
【注】：
 如组织样本不是高脂肪样本，匀浆介质一般用PBS或生理盐水；
 如组织样本为高脂肪样本或部分高脂样本，匀浆介质统一用无水乙醇。

测定方法：
酶标仪TC测定操作:
1、 按下表依次加入试剂：
2、 充分混匀, 37℃水浴中孵育10分钟。
3、 酶标仪测定510nm吸光度。以空白孔调零，读取标准孔和各待测孔的吸光度。

全自动上机操作
计算：
血清、血浆等液体样本：
（1）酶标仪比色
TC(mmol/L)=｛(样本孔吸光度-空白孔吸光度)/(标准孔吸光度-空白孔吸光度)｝×标准品浓度（5.17mmol/L）

（2）
TC(mmol/L)=（样本管吸光度/校准管吸光度）×标准品浓度（5.17mmol/L）

细胞、组织等样本：
（1）酶标仪比色
TC(mmol/gprot)=｛(样本孔吸光度-空白孔吸光度)/(标准孔吸光度-空白孔吸光度)｝×标准品浓度（5.17mmol/L）÷待测样本浓度(gprot/L)

（2）
TC(mmol/gprot)= （样本管吸光度/校准管吸光度）×标准品浓度（5.17mmol/L）
÷待测样本浓度(gprot/L)